수질 식물성 플랑크톤 측정법 - 현미경 계수법
- 공정시험법/수질오염공정시험기준
- 2017. 12. 29. 15:00
수질오염공정시험기준(ES 04705.1b)
수질 식물성 플랑크톤 측정법 - 현미경 계수법
1.0 개요
1.1 목적
이 시험기준은 물속의 부유생물인 식물성 플랑크톤을 현미경계수법을 이용하여 개체수를 조사하는 정량분석 방법이다.
1.2 적용범위
이 시험기준은 지표수에 적용할 수 있다.
4.0 시약 및 표준용액
4.1 루골 용액
요오드화칼륨 (potassium iodide, KI, 분자량 : 166.00) 20 g을 정제수 200 mL ~ 300 mL에 녹이고 여기에 요오드 (iodine, I, 분자량 : 126.90) 10 g을 넣어 녹인 다음 정제수로 1 L로 한다. 이 용액을 사용하기 수일 전에 아세트산 (acetic acid, CH3COOH, 분자량 : 60.05) 20 mL를 넣어 갈색 시약병에 보존한다.
4.2 포르말린 용액
폼알데하이드(formaldehyde, H2CO, 분자량 : 30.03, 35.0 % ~ 38.0 % 함유)에 탄산수소나트륨(sodium hydrogen carbonate, NaHCO3, 분자량 : 84.01)을 넣어 pH를 7로 조정하여 사용하거나 폼알데하이드 함량이 8 %인 중성완충폼알데하이드용액(조직고정용)을 사용한다.
4.3 글루타르알데하이드 (glutaraldehyde, CH2(CH2CHO)2, 분자량 : 100.12)
7.0 분석절차
7.1 일반사항
시료의 개체수는 계수면적당 10 ~ 40 정도가 되도록 희석 또는 농축한다.
[주 1]계수면적:현미경 시야에서 계수하기 위하여 계수 챔버 내부 혹은 접안 마이크로미터에 의하여 설정된 스트립 혹은 격자의 크기로 한다.
7.2 시료 희석
시료가 육안으로 녹색이나 갈색으로 보일 경우 정제수로 적절한 농도로 희석한다.
7.3 시료 농축
7.3.1 원심분리방법
7.3.1.1 일정량의 시료를 원심침전관에 넣고 1,000 × g로 20분정도 원심분리하여 일정배율로 농축한다.
7.3.1.2 미세조류의 경우는 1,500 × g에서 30분정도 원심분리를 행한다. 침강성이 좋지 않은 남조류가 많은 시료는 루골용액으로 고정한 후 농축하거나 일정량을 플랑크톤 넷트 또는 핸드 넷트로 걸러 일정배율로 농축한다.
7.3.2 자연침전법
7.3.2.1 일정시료에 포르말린용액을 1 % 또는 루골용액을 (1 ~ 2) % 가하여 플랑크톤을 고정시켜 실린더 용기에 넣고 일정시간 정치 후(0.5 h/mm) 싸이폰을 이용하여 상층액을 따라 내어 일정량으로 농축한다.
[주 2] 침전 용기는 얇고 투명한 유리 실린더를 사용한다.
7.3.2.2 직경이 작은 실린더로 옮겨 2회 ∼ 3회 반복한다.
7.4 정성시험
정성시험의 목적은 식물성 플랑크톤의 종류를 조사하는 것으로 검경배율 100배 ~ 1,000배 시야에서 세포의 형태와 내부구조 등의 미세한 사항을 관찰하면서 종 분류표에 따라 식물성 플랑크톤 종을 확인하여 계수일지에 기재한다.(부록 담수조류 분류표 및 그림 참조)
7.5 정량시험
식물성 플랑크톤의 계수는 정확성과 편리성을 위하여 일정 부피를 갖는 계수용 챔버를 사용한다. 식물성 플랑크톤의 동정에는 고배율이 많이 이용되지만 계수에는 저 ~ 중배율이 많이 이용된다. 계수시 식물성 플랑크톤의 종류에 따라 요구되는 배율이 달라지므로 아래 방법 중 하나를 이용한다.
7.5.1 저배율 방법(200배율 이하)
7.5.1.1 스트립 이용 계수
세즈윅-라프터 챔버에 커버글라스를 비스듬히 걸쳐 놓고 챔버 내의 모서리에 기포가 생성되지 않도록 하면서 잘 혼합된 시료를 조심스럽게 피펫으로 채운다. 계수하기 전에 플랑크톤을 침전시키기 위하여 15분 정도 방치시킨다. 세즈윅-라프터 챔버 내부를 일정한 길이와 넓이 (strip)로 구획하여 10스트립 이상 반복 계수하고 다음 계산식으로부터 1 mL의 개체수를 산출한다.
C = 계수된 개체수의 합
L = 검경구획의 길이 (mm)
W = 검경구획의 폭 (mm)
D = 검경구획의 깊이 (세즈윅-라프터 챔버 깊이, 1 mm)
N = 검경한 시야의 횟수
7.5.1.2 격자 이용 계수
세즈윅-라프터 챔버에서 격자를 사용할 경우 계수챔버 내에서 일정한 크기의 격자를 무작위로 10회 이상 반복 계수하며 다음 계산식으로부터 1 mL의 개체수를 산출한다.
C = 계수된 개체수의 합
A = 격자의 면적 (mm2)
D = 검경한 격자의 깊이 (세즈윅-라프터 챔버 깊이, 1 mm)
N = 검경한 시야의 횟수
[주 3] 세즈윅-라프터 챔버는 조작이 편리하고 재현성이 높은 반면 중배율 이상에서는 관찰이 어렵기 때문에 미소 플랑크톤 (nano plankton)의 검경에는 적절하지 않음.
[주 4]시료를 챔버에 채울 때 피펫은 입구가 넓은 것을 사용하는 것이 좋음.
[주 5]정체시간이 짧을 경우 충분히 침전되지 않은 개체가 계수시 제외되어 오차 유발 요인이 됨.
[주 6]검경시야의 크기의 설정은 세즈윅-라프터 챔버 내부를 구획하거나, 격자 혹은 스트립상의 접안 마이크로미터를 사용함. 이 때 접안 마이크로미터의 크기는 현미경상의 계수배율에 따라 변동되기 때문에 대물 마이크로미터를 이용하여 각 계수배율에서의 스트립 혹은 격자의 크기를 측정하여야 함.
[주 7] 계수시 스트립을 이용할 경우, 양쪽 경계 면에 걸린 개체는 하나의 경계면에 대해서만 계수함.
[주 8]계수시 격자의 경우 격자 경계면에 걸린 개체는 격자의 4면 중 2면에 걸린 개체는 계수하고 나머지 2면에 들어온 개체는 계수하지 않음.
[주 9]시료가 희석되거나 농축되었을 경우 개체수 계산시 보정계수를 산출하여 적용함.
7.5.2 중배율 방법 (200배율 ∼ 500배율 이하)
7.5.2.1 팔머-말로니 챔버 이용 계수
팔머-말로니 챔버에 커버글라스를 덮고 조심스럽게 시료를 피펫으로 채운 후 15분 정도 정치시킨 다음 계수한다. 계수는 팔머-말로니 챔버 내에서 일정 격자 크기를 무작위로 10회 이상 반복하여 계수하고 1 mL내의 개체수는 다음 식으로 계산한다.
C = 계수된 개체수의 합
A = 격자의 면적 (mm2)
D = 검경한 격자의 깊이 (팔머-말로니 챔버의 깊이 0.4 mm)
N = 검경한 시야의 횟수
7.5.2.2 혈구계수기 이용 계수
혈구계수기에 커버글라스를 덮고 조심스럽게 시료용액을 주입시킨다. 5분 정도 정치시킨 다음 혈구계수기 격자상의 개체수를 계수한다. 이때 혈구계수기는 5회 이상 반복한다. 1 mL내의 개체 수는 다음 식으로 계산한다.
C = 계수된 개체수의 합
A = 혈구계수기 면적(mm2)
D = 혈구계수기 깊이(mm)
N = 검경한 시야의 횟수
[주 10] 팔머-말로니 챔버는 마이크로시스티스 같은 미소 플랑크톤 (nano plankton)의 계수에 적절함.
[주 11] 집락을 형성하는 조류들은 필요에 따라 단일세포로 분리한 후 고르게 현탁하여 시료로 함.
[주 12] 시료를 챔버에 채울 때 피펫은 입구가 넓은 것을 사용하는 것이 좋음.
[주 13] 검경시야의 설정은 팔머-말로니 챔버 내부를 구획하거나, 격자상의 접안 마이크로미터를 사용함. 이 때 접안 마이크로미터의 크기는 현미경상의 계수배율 에 따라 변동되기 때문에 대물 마이크로미터를 이용하여 각 계수배율 하에서 스트립 혹은 격자의 크기를 측정하여야 함.
[주 14] 혈구계수기의 경우는 가장 큰 격자 크기가 1 mm × 1 mm인 것을 이용함.
[주 15] 정체시간이 짧을 경우 충분히 침전되지 않은 개체가 계수시 제외되어 오차유발 요인이 될 수 있음.
[주 16] 계수시 격자의 경우 격자 경계 면에 걸린 개체는 격자의 4면 중 2면에 걸린 개체는 계수하고 나머지 2면에 들어온 개체는 계수하지 않음.
[주 17] 시료가 희석되거나 농축되었을 경우는 개체수 계산시 보정계수를 산출하여 적 용함.
8.0 결과보고
측정결과는 ‘식물성플랑크톤 계수일지’에 기입하여 보고한다.
'공정시험법 > 수질오염공정시험기준' 카테고리의 다른 글
수질 유기인 분석법 - 용매추출/액체크로마토그래피(LC) (0) | 2018.10.05 |
---|---|
수질 석유계총탄화수소(TPH) 분석법 - 용매추출/액체크로마토그래피(LC) (0) | 2018.10.04 |
수질 다이에틸헥실프탈레이트 분석법 - 용매추출/기체크로마토그래피 질량분석법(GC/MASS) (0) | 2018.10.03 |
수질 물벼룩을 이용한 급성독성(생태독성) 시험법 (0) | 2017.12.28 |
수질 대장균 측정법 - 효소이용 정량법 (0) | 2017.12.28 |
수질 분원성 대장균군 측정법 - 시험관법 (0) | 2017.12.27 |