수질 총대장균군 측정법 - 막여과법

수질오염공정시험기준(ES 04701.1c)

수질 총대장균군 측정법 - 막여과법

1.0 개요

1.1 목적

이 시험기준은 물속에 존재하는 총대장균군을 측정하기 위하여 페트리접시에 배지를 올려놓은 다음 배양 후 금속성 광택을 띠는 적색이나 진한적색 계통의 집락을 계수하는 방법이다.

 

1.2 적용범위

이 시험기준은 지표수, 지하수, 폐수 등에 적용할 수 있다.

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4.0 시약 및 표준용액

 

4.1 배지

4.1.1 막여과법 고체배지는 에탄올(95 %) 20 mL를 포함한 정제수 1 L에 배지를표 1의 막여과법 고체배지 조성대로 넣고 pH(7.2 ± 0.2)를 확인한 다음 완전히 녹을 때까지 저어주면서 끓인다. 이 때 고압증기멸균하지 않는다. 끓인 후 45 ℃ ～ 50 ℃까지 식힌 다음 5 mL ～ 7 mL를 페트리접시에 넣어 굳힌다.

4.1.2 조제된 배지는 2 ℃ ～ 10 ℃의 냉암소에서 2주간 보관할 수 있다.

4.1.3 막여과법 액체배지의 경우에는, 고체배지와 마찬가지로 에탄올(95 %) 20 mL를 포함한 정제수 1 L에 배지를 표 2의 막여과법 액체배지 조성대로 넣고 pH (7.2 ± 0.2)를 확인한 다음 완전히 녹을 때까지 저어주면서 끓인다. 이때 고압증기멸균하지 않는다. 끓인 후 45 ℃ ～ 50 ℃까지 식힌 다음 사용한다.

4.2 희석액

4.2.1 인산완충희석액

인산이수소칼륨 (monopotassium phosphate, KH2PO4, 분자량 : 136.09) 34 g을 500 mL의 정제수에 녹인 후 수산화나트륨용액(0.5 M)으로 실온에서 pH를 (7.2 ± 0.2)를 확인한 다음 후 정제수를 넣어 1 L가 되도록 만들어 이를 보존용 원액으로 한다. 이 보존용 원액 1.25 mL와 염화마그네슘․6수화물 (magnesium chloride, MgCl2․6H2O, 분자량 : 203.30) 81.1 g을 정제수 1 L에 녹여 만든 염화마그네슘용액 5.0 mL를 넣은 다음 정제수로 1 L가 되도록 하여 인산완충희석액을 만든 후 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균하여 사용한다.

 

4.2.2 펩톤희석액

정제수에 10 % 펩톤 (peptone) 용액을 넣어 펩톤의 최종 농도가 0.1 %가 되도록 희석하고, 실온에서 pH가 (6.8 ± 0.2)를 확인한 다음 121 ℃에서 15분간 고압증기멸균하여 사용한다.

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7.0 분석절차

 

7.1 멸균된 핀셋으로 여과막을 눈금이 위로 가게 하여 여과장치의 지지대 위에 올려놓은 후, 막여과장치의 깔때기를 조심스럽게 부착시킨다.

 

7.2 페트리접시에 20개 ～ 80개의 세균 집락을 형성하도록 시료(표 3참조)를 여과관 상부에 주입하면서 흡입여과하고 멸균수 20 mL ～ 30 mL로 씻어준다.

[주 1] 여과하여야 할 예상 시료량이 10 mL보다 적을 경우에는 멸균된 희석액으로 희석하여 여과하여야 한다.

[주 2] 총대장균군수를 예측할 수 없을 경우에는 여과량을 달리하여 여러개의 시료를 분석하고, 한 여과 표면위의 모든 형태의 집락수가 200개 이상의 집락이 형성되지 않도록 하여야 한다.

 

7.3 막여과법 고체배지를 사용할 경우에는 여과한 여과막을 눈금이 위로 가게 하여 페트리접시의 배지위에 올려놓은 다음 페트리접시를 거꾸로 놓고 (35 ± 0.5) ℃에서 22시간 ～ 24시간 배양하며, 막여과법 액체배지를 사용할 경우에는 1.8 mL ～ 2.0 mL의 액체배지가 들어있는 페트리접시의 흡수패드 위에 여과한 여과막을 기포가 생기지 않도록 올려놓은 다음 (35 ± 0.5) ℃에서 22시간 ～ 24시간 동안 배양한다.

 

7.4 배양 후 금속성 광택을 띠는 적색이나 진한적색 계통의 집락을 계수하며, 집락수가 20개 ～ 80개의 범위에 드는 것을 선정하여 다음의 식에 의해 계산한다.

 

C = 생성된 집락수

V = 여과한 시료량 (mL)

 

7.5 배지표면에 총대장균군 이외의 다른 세균이 너무 많이 자랐을 경우에는 총대장균군수와 함께 이와 같은 내용을 비고에 기록하고 다시 같은 지점의 시료를 채취하여 검사한다.

[주 3] 재검사시에는 시료의 여과량을 줄이고 여과막의 수를 늘려 다른 세균에 의한 간섭현상을 줄인다.

 

7.6 정확성을 기하기 위하여 실험할 때마다 1개 이상의 음성대조군 시험을 상기 방법과 동일한 조건하에서 같이 실시하여야 하며, 이 때 음성대조군 여과막에서는 전형적인 총대장균군의 집락이 없어야 한다.

 

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8.0 결과보고

 

8.1 ‘총대장균군수/100 mL’로 표기하며, 반올림하여 유효숫자 2자리로 표기한다. 결과값의 유효숫자가 2자리 미만이 될 경우에는 1자리로 표기한다. 다만, 결과값이 소수점을 포함하는 경우에는 반올림하여 정수로 표기한다.

 

8.2 집락들이 서로 융합되어 있을 경우에는 ‘CG (confluent growth)’로, 집락수가 200개 이상으로 계수가 불가능한 경우에는 ‘TNTC (too numerous to count)’로 표기하고 시료를 희석하거나 적게 취하여 다시 실험한다.

 

8.3 수질이 양호한 경우 검출되는 총대장균군수가 일반적으로 낮으므로 모든 집락을 다 계수하여 표기한다. 

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